产品详情：

含dNTP混合液不含dNTP混合液
E002-01A 250U 230元 E002-02A 250U 180元
E002-01B A包装x5 1035元 E002-02B A包装x5 810元

产品描述：
本酶为Pyrococcus furiosus中分离的pfu DNA pol 基因在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。Pfu DNA聚合酶具有3'-5'外切酶(校正)活性，当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。Pfu DNA聚合酶为使用范围最广的高保真DNA聚合酶，其错误率仅为1.3x10^-6，推荐Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反应。

产品用途：
用于要求保真度比较高的PCR反应，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突变、全基因合成等（参见 Sinobio 实验方案）。

使用建议：
Pfu DNA聚合酶产生的PCR产物为平滑末端，无3'端"A"突出，其PCR产物的克隆有两种方案。
1. PCR前引物进行5'端加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见 Sinobio实验方案）。
2. 将产物3'末端加A后再与T-Vector连接（参见 Sinobio 实验方案）。
3. 由于Pfu DNA聚合酶的校对活性可引起引物从3′端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30碱基。另外为了减少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配置反应体系，并最后加入Pfu酶。

　
图例一）50μl扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对500bp～6.0KB片段的扩增结果。
泳道M：1KB DNA Marker；
泳道1：0.5kb；泳道2:1.0kb；
泳3： 2.0kb；泳道4:3.0kb；
泳道5：4.0kb；泳道6:6.0kb
泳道M：1KB DNA Marker；
图例二） 5 0 μ l 扩增体系中，分别以50ng～0.05ng人基因组DNA为模板，可对特定基因片段（380bp）进行很好的扩增。
模板量:
泳道1：50ng；泳道2：5ng；
泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；
泳道M：DL2000 DNA Marker

产品包装：

Pfu DNA 聚合酶（5U/ul）	50μl
dNTP混合液（各10mM）*	200μl
10×Pfu Buffer with Mg²⁺	1ml
*E002-02系列不含dNTP混合液

质量保证：
经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：
在74oC条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。

常用反应体系（50μl）:

10×Pfu Buffer	5µl
上游引物	0.2-1.0µM(终浓度)
下游引物	0.2-1.0µM(终浓度)
dNTP(各10mM)	1.0µl
模板	1-50ng（质粒）
模板	10ng-1µg(基因组)
SinoBio Pfu	0.25μl（1.25U） 0.5μl（基因组）
ddH₂O	至50µl

常用PCR循环
当扩增片段<3K：
94℃ 1分钟30秒
30次循环： 94oC，30秒
57℃，30秒
72℃，根据产物长度调整，120秒/1kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温
　　
当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
94℃， 20秒
30次循环： 94℃，5秒，
68℃，根据产物长度调整，120秒/1kb
72℃ 5分钟
4℃ 保温